細(xì)胞克隆形成實驗服務(wù)

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

【服務(wù)內(nèi)容】

細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

【項目和周期】

項目內(nèi)容：

1、取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細(xì)胞，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。

2、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞分別以每皿100或200個細(xì)胞的梯度密度分別接種含37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中或者6孔板中，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細(xì)胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3周。

3、經(jīng)常觀察，當(dāng)出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)。加4%多聚甲醛固定細(xì)胞5mL固定15分鐘。然后去固定液，加適量吉姆薩染色液染10～30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。

4、將平皿在顯微鏡（低倍鏡）計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆數(shù)。最后計算克隆形成率。

          克隆形成率 =（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）×100%。

周期：2~3周

【客戶提供的材料】

 1.待檢測或處理的細(xì)胞；如果常見的人和大小鼠細(xì)胞系，公司可免費提供。

 2.細(xì)胞處理的相關(guān)藥物和實驗方案；

【反饋給客戶結(jié)果】

 1、提供相應(yīng)實驗數(shù)據(jù)和圖表；

 2、提供具體的實驗報告；